Լյումինեսցենտային ֆիլտրը ֆլուորեսցենտային մանրադիտակի կարևոր բաղադրիչն է: Տիպիկ համակարգն ունի երեք հիմնական զտիչներ՝ գրգռման զտիչ, արտանետման զտիչ և երկխրոնիկ հայելի: Դրանք սովորաբար փաթեթավորվում են խորանարդի մեջ, որպեսզի խումբը միասին տեղադրվի մանրադիտակի մեջ:
Ինչպե՞ս է աշխատում լյումինեսցենտային ֆիլտրը:
Գրգռման ֆիլտր
Գրգռման ֆիլտրերը փոխանցում են որոշակի ալիքի երկարության լույս և արգելափակում են այլ ալիքների երկարությունները: Դրանք կարող են օգտագործվել տարբեր գույներ արտադրելու համար՝ կարգավորելով ֆիլտրը՝ թույլ տալով միայն մեկ գույնի միջով անցնել: Գրգռման ֆիլտրերը լինում են երկու հիմնական տեսակի՝ երկար անցումային զտիչներ և ժապավենային ֆիլտրեր: Գրգռիչը սովորաբար ժապավենային ֆիլտր է, որն անցնում է միայն ֆտորոֆորի կողմից ներծծված ալիքի երկարությունները, այդպիսով նվազագույնի հասցնելով ֆլյուորեսցենտային այլ աղբյուրների գրգռումը և արգելափակելով գրգռման լույսը ֆլյուորեսցենտային արտանետման գոտում: Ինչպես ցույց է տրված նկարի կապույտ գիծը, BP-ն 460-495 է, ինչը նշանակում է, որ այն կարող է անցնել միայն 460-495 նմ ֆլուորեսցենցիայի միջով:
Այն տեղադրված է ֆլուորեսցենտային մանրադիտակի լուսավորության ուղու մեջ և զտում է լույսի աղբյուրի բոլոր ալիքի երկարությունները, բացառությամբ ֆտորոֆորի գրգռման տիրույթի: Ֆիլտրի նվազագույն փոխանցումը թելադրում է պատկերների պայծառությունն ու պայծառությունը: Ցանկացած գրգռման ֆիլտրի համար առաջարկվում է նվազագույնը 40% փոխանցում, որպեսզի փոխանցումը իդեալական լինի >85%: Գրգռման ֆիլտրի թողունակությունը պետք է ամբողջությամբ լինի ֆտորոֆորի գրգռման միջակայքում, որպեսզի ֆիլտրի կենտրոնական ալիքի երկարությունը (CWL) հնարավորինս մոտ լինի ֆտորոֆորի գրգռման ալիքի գագաթնակետին: Գրգռման ֆիլտրի օպտիկական խտությունը (OD) թելադրում է ֆոնի պատկերի խավարը. OD-ը չափում է, թե որքանով է ֆիլտրը արգելափակում ալիքի երկարությունները հաղորդման տիրույթից կամ թողունակությունից դուրս: Առաջարկվում է նվազագույն OD 3.0, բայց OD 6.0 կամ ավելի իդեալական է:
Արտանետումների զտիչ
Արտանետումների ֆիլտրերը նպատակ ունեն թույլ տալ, որ նմուշից ցանկալի ֆլուորեսցենտը հասնի դետեկտորին: Նրանք արգելափակում են ավելի կարճ ալիքների երկարությունները և ունեն բարձր փոխանցում ավելի երկար ալիքների համար: Ֆիլտրի տեսակը նույնպես կապված է մի թվի հետ, օրինակ՝ BA510IF նկարում (միջամտության արգելքի զտիչ), այդ նշանակումը վերաբերում է ալիքի երկարությանը իր առավելագույն հաղորդման 50%-ում:
Գրգռման ֆիլտրերի վերաբերյալ նույն առաջարկությունները ճիշտ են արտանետումների ֆիլտրերի դեպքում՝ նվազագույն փոխանցում, թողունակություն, OD և CWL: Իդեալական CWL, նվազագույն փոխանցման և OD համակցությամբ արտանետումների զտիչը ապահովում է հնարավոր ամենապայծառ պատկերները, հնարավորինս խորը արգելափակումով և ապահովում է ամենաթույլ արտանետման ազդանշանների հայտնաբերումը:
Dichroic Mirror
Երկխրոնիկ հայելին տեղադրվում է գրգռման ֆիլտրի և արտանետման ֆիլտրի միջև 45° անկյան տակ և արտացոլում է գրգռման ազդանշանը դեպի ֆտորոֆորը, մինչդեռ արտանետման ազդանշանը փոխանցում է դետեկտորին: Իդեալական երկխրոնիկ ֆիլտրերը և ճառագայթների բաժանիչները ունեն կտրուկ անցումներ առավելագույն արտացոլման և առավելագույն փոխանցման միջև՝ գրգռման ֆիլտրի թողունակության >95% արտացոլմամբ և արտանետումների ֆիլտրի թողունակության համար ավելի քան 90% փոխանցմամբ: Ընտրեք զտիչը՝ նկատի ունենալով ֆտորոֆորի հատման ալիքի երկարությունը (λ), որպեսզի նվազագույնի հասցվի մոլորված լույսը և առավելագույնի հասցնի լյումինեսցենտ պատկերի ազդանշան-աղմուկ հարաբերակցությունը:
Այս պատկերի երկխրոնիկ հայելին DM505-ն է, որն այդպես է անվանվել, քանի որ 505 նանոմետրը ալիքի երկարությունն է այս հայելու առավելագույն հաղորդման 50%-ի դեպքում: Այս հայելու փոխանցման կորը ցույց է տալիս բարձր փոխանցում 505 նմ-ից բարձր, փոխանցման կտրուկ անկում դեպի ձախ՝ 505 նանոմետր, և առավելագույն անդրադարձողականություն դեպի ձախ՝ 505 նանոմետր, բայց դեռ կարող է ունենալ որոշակի փոխանցում 505 նմ-ից ցածր:
Ո՞րն է տարբերությունը երկար անցումային և ժապավենային ֆիլտրերի միջև:
Լյումինեսցենտային ֆիլտրերը կարելի է բաժանել երկու տեսակի՝ երկար անցում (LP) և ժապավենային անցում (BP):
Long pass ֆիլտրերը փոխանցում են երկար ալիքներ և արգելափակում են ավելի կարճները: Անջատման ալիքի երկարությունը գագաթնակետային փոխանցման 50%-ի արժեքն է, և բոլոր ալիքի երկարությունները, որոնք վեր են կտրվածից, փոխանցվում են երկար անցումային զտիչներով: Դրանք հաճախ օգտագործվում են երկխրոնիկ հայելիների և արտանետումների զտիչների մեջ: Longpass ֆիլտրերը պետք է օգտագործվեն, երբ կիրառումը պահանջում է առավելագույն արտանետումների հավաքում, և երբ սպեկտրային խտրականությունը ցանկալի կամ անհրաժեշտ չէ, ինչը սովորաբար վերաբերում է զոնդերին, որոնք առաջացնում են մեկ արտանետվող տեսակ ֆոնային ավտոֆլյորեսցենտության համեմատաբար ցածր մակարդակ ունեցող նմուշներում:
Շղթայական ֆիլտրերը միայն փոխանցում են որոշակի ալիքի երկարության գոտի և արգելափակում են մյուսները: Նրանք նվազեցնում են խաչաձևությունը՝ թույլ տալով փոխանցել միայն ֆտորոֆորի արտանետումների սպեկտրի ամենաուժեղ հատվածը, նվազեցնել ավտոֆլյորեսցենտային աղմուկը և այդպիսով բարելավել ազդանշան-աղմուկ հարաբերակցությունը բարձր ֆոնային ավտոֆլյորեսցենտային նմուշներում, ինչը երկար անցումային ֆիլտրերը չեն կարող առաջարկել:
Քանի՞ տեսակի լյումինեսցենտային ֆիլտրերի հավաքածուներ կարող է մատակարարել BestScope-ը:
Զտիչների որոշ սովորական տեսակներ ներառում են կապույտ, կանաչ և ուլտրամանուշակագույն զտիչներ: Ինչպես ցույց է տրված աղյուսակում:
| Զտիչների հավաքածու | Գրգռման ֆիլտր | Dichroic Mirror | Արգելքի զտիչ | LED լամպի ալիքի երկարությունը | Դիմում |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485 նմ | ·FITC: Լյումինեսցենտային հակամարմինների մեթոդ · Թթվային նարնջագույն՝ ԴՆԹ, ՌՆԹ ·Աուրամին` տուբերկուլյոզի բացիլ ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535 նմ | · Rhodamine, TRITC: Լյումինեսցենտային հակամարմինների մեթոդ ·Պրոպիդիումի յոդիդ՝ ԴՆԹ · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365 նմ | · Ավտոֆլյուորեսցենտային դիտարկում ·DAPI. ԴՆԹ-ի ներկում · Hoechest 332528, 33342: օգտագործվում է քրոմոսոմների ներկման համար |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405 նմ | · Կատեխոլամիններ ·5-հիդրօքսի տրիպտամին ·Տետրացիկլին. կմախք, ատամներ |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 նմ | ·Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Ֆլյուորեսցենտային ձեռքբերման մեջ օգտագործվող ֆիլտրերի հավաքածուները նախագծված են լյումինեսցենտային հավելվածներում օգտագործվող հիմնական ալիքների երկարությունների շուրջ, որոնք հիմնված են ամենաշատ օգտագործվող ֆտորոֆորների շուրջ: Այդ իսկ պատճառով, դրանք նաև անվանվել են պատկերահանման համար նախատեսված ֆտորոֆորի անունով, ինչպիսիք են DAPI (կապույտ), FITC (կանաչ) կամ TRITC (կարմիր) ֆիլտրի խորանարդները:
| Զտիչների հավաքածու | Գրգռման ֆիլտր | Dichroic Mirror | Արգելքի զտիչ | LED լամպի ալիքի երկարությունը |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 նմ |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365 նմ |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 նմ |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450 նմ |
| Տեխասի կարմիր | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560 նմ |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560 նմ |
Ինչպե՞ս ընտրել լյումինեսցենտային ֆիլտր:
1. Լյումինեսցենտային ֆիլտրի ընտրության սկզբունքն է թույլ տալ, որ լյումինեսցենտային/արտանետվող լույսը հնարավորինս անցնի պատկերի ծայրով և միևնույն ժամանակ ամբողջությամբ արգելափակի գրգռման լույսը, որպեսզի ստացվի ազդանշան-աղմուկ հարաբերակցությունը ամենաբարձրը: Հատկապես բազմաֆոտոնային գրգռման և ընդհանուր ներքին արտացոլման մանրադիտակի կիրառման համար թույլ աղմուկը նույնպես մեծ միջամտություն կառաջացնի պատկերային էֆեկտի վրա, ուստի ազդանշանի և աղմուկի հարաբերակցության պահանջն ավելի բարձր է:
2. Իմացեք ֆտորոֆորի գրգռման և արտանետումների սպեկտրը: Ֆլյուորեսցենտային ֆիլտրերի հավաքածու ստեղծելու համար, որը ստեղծում է բարձրորակ, բարձր կոնտրաստային պատկեր սև ֆոնով, գրգռման և արտանետման ֆիլտրերը պետք է հասնեն բարձր փոխանցման նվազագույն թափանցելիությամբ այն շրջանների վրա, որոնք համապատասխանում են ֆտորոֆորի գրգռման գագաթնակետին կամ արտանետմանը:
3. Հաշվի առեք լյումինեսցենտային ֆիլտրերի ամրությունը: Այս զտիչները պետք է անթափանց լինեն ինտենսիվ լույսի աղբյուրներից, որոնք առաջացնում են ուլտրամանուշակագույն (ուլտրամանուշակագույն) լույս, որը կարող է հանգեցնել «այրման», հատկապես գրգռիչ ֆիլտրի, քանի որ այն ենթարկվում է լուսավորության աղբյուրի ամբողջ ինտենսիվությանը:
Տարբեր լյումինեսցենտային նմուշների պատկերներ
Ռեսուրսները հավաքվում և կազմակերպվում են ինտերնետում և օգտագործվում են միայն սովորելու և հաղորդակցվելու համար: Եթե կա որևէ խախտում, խնդրում ենք կապվել մեզ հետ ջնջելու համար:
Հրապարակման ժամանակը՝ Dec-09-2022